Разработка видоспецифического метода определения пробиотических бактерий с помоцью ПЦР

Бродский И.Б., Болотов В.Д.

ЗАО «Партнер», Москва, Россия

Тезисы 2-го Международного конгресса по пробиотикам и 6-й Объединенной научной сессии Института гастроэнтерологии и клинической фармакологии СПбГМА им. И.И. Мечникова, ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского и ФГУ ВГНКИ «Санкт-Петербург – Пробиотики-2009», с. М6.

Цель исследования: разработать метод качественного и количественного определения живых бифидо- и лактобактерий в кисломолочных продуктах, полиштаммовых пробиотических препаратах и клинических анализах с применением метода полимеразной цепной реакции.

Обоснование исследования. В настоящее время пищевая и фармацевтическая промышленность выпускает различные продукты питания и фармацевтические препараты, содержащие в своем составе живые бифидо- и лактобактерии для профилактики и лечения заболеваний. При этом стандартизация и контроль качества данной продукции в настоящее время основаны на бактериологическом и бактериоскопическом анализе. Особенную сложность представляет количественное определение пробиотических бактерий в кисломолочных продуктах, где также присутствует кефирная микрофлора, препаратах и БАД с несколькими видами бактерий и в анализах клинических образцов.

Результаты. Нами были разработаны видоспецифические праймеры для дифференциального определения пробиотических бактерий в их смесях и в присутствии сопутствующей микрофлоры. С помощью мультиплексной ПЦР, когда реакционная смесь содержит весь спектр праймеров на исследуемый ряд бактерий, однако в саму реакцию вступают только те, которые узнают свою специфическую матрицу, а остальные остаются незадействованными, проведен анализ кисломолочного продукта «Бифидок^®» и полиштаммовых препаратов. При этом дифференцирующим признаком является молекулярная масса ПЦР продукта, которая индивидуальна для каждого вида бактерии.

Вывод. При комбинации с бактериологическим исследованием данный метод дает возможность определить количество живых бактерий без использования микроскопии, что позволяет объективизировать данный анализ.